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双相血培养法在猪场药物筛选中的应用
2014年03月05日
摘要:采用双相血培养方法,从疑是发生败血症的猪血液中分离出1株细菌,经初步鉴定为链球菌,通过药敏试验,筛选出4种敏感药物,其中多西环素为高度敏感药物,为临床治疗提供了依据。
关键词:双相血培养 细菌 药敏试验
 
        败血症是一种严重而危急的全身感染性疾病,其诊断治疗主要依赖于血液、骨髓标本的细菌培养及药敏试验。传统手工培养法由于血液中存在的病原菌的各种抑制因子(如吞噬细胞、抗体、抗生素等),致使血培养阳性率不高;阳性标本也因细菌生长缓慢,需时3~7d,且标本运输不方便;远远不能满足兽医临床要求。我们采用双相血培养法进行血培养,该法简便、快速,且可提高细菌检出率,同时对阳性标本可以进行直接法药敏试验,是一种适合猪场开展药敏试验,降低药物滥用的便捷的方法。
       1、 材料与方法
       1.1材料
       1.1.1实验动物
       选取汩罗某猪场正在发病的猪,其体温超过40℃,消瘦不吃,被毛粗糙,猪耳、颈、四肢内侧、腹下等皮肤有紫斑。
       1.1.2试剂:
       双相血培养瓶:济南百博生物技术有限责任公司,批号:2013130601
       1.2方法
       1.2.1采血和接种
       选取疑似发生败血症的病猪3头,每头采血2次,两次间隔4小时以上且少于24小时。用严格的无菌手续,采血量与血培养瓶液体比为1:10,采血后直接放入双相血培养瓶中。
       1.2.2培养
       将血培养瓶放置于37℃±1℃,连续放置7天,每天早上观察并记录菌生长情况。
       1.2.3菌种的分离鉴定:
        对培养出的细菌涂片、革兰氏染色、镜检。
       1.2.4药敏实验  
       将培养出的细菌按纸片扩散法(改良Kirby-Bauer法,K-B法)进行药敏试验,测量抑菌环的直径,按抑菌环直径判断细菌的药物敏感性。
       2、 结果
       2.1细菌培养结果
       本次实验样本为6个,其中检出阳性的有4个,阳性率66.7%,在发病的样本中,同一样本有阳性和阴性的,说明本实验方法要求的间隔4小时以上是必须的,也说明采血      两次可以提高检出率。
            表1 双相血培养细菌情况

  发病猪A 发病猪B 发病猪C
A1 A2 B1 B2 C1 C2
第一天 + +
第二天 + + +
第三天 + + + +
第四天 + + + +
第五天 + + + +
第六天 + + + +
第七天 + + + +